بررسی وضعیت متیلاسیون در پروموتور ژن های vhl، runx۳ و ecad و بیان این ژن ها در سلول های cd۳۴+ خون بند ناف
چکیده
زمینه و هدف: فرایندهای تمایزی ویژه به رده های گوناگون سلولی، با فاکتورهایی نظیر فاکتورهای نسخه برداری، عناصر سرکوبگر تومور و عناصر سیگنالینگ داخل سلول دارای ارتباط تنگاتنگ است که گروهی از این فاکتورها شامل vhl، ecad و runx3می باشند. مکانیسم های کنترلی تاثیرگذار توسط این فاکتورها نیز اپی ژنتیک است که دارای مکانیسم های متعددی از جمله متیلاسیون و استیلاسیون می باشد. در واقع هدف اصلی مطالعه ی ذیل، بررسی وضعیت بیان ژن های vhl، ecad و runx3 در سلول های بنیادی cd34+ خون بند ناف و آشکار ساختن الگوی متیلاسیون ژن های موردنظر در این مرحله بود. روش بررسی: پس از جداسازی سلول های بنیادی از خون بند ناف و کشت سلول های موردنظر در محیط مخصوص و نیز تخلیص ژنوم از سلول ها، در مرحله ی اول از rna مورد نظر، cdna ساخته شد و واکنش pcr نیز برای ژن های مورد مطالعه انجام گرفت. در مراحل بعدی نیز از dna پردازش شده مراحل قبل، برای انجام واکنش های msp استفاده شد. یافته ها: پس از انجام واکنش pcr با پرایمرهای طراحی شده برای استفاده در real time pcr و cdna مربوط به rna سلول های بنیادی، این نتایج به دست آمد که همه ی ژن های مورد مطالعه، در سلول های بنیادی cd34+ بیان می شوند. با انجام mspدر مرحله ی دیگری از مطالعه نیز مشخص شد که ژن های ecad و runx3 دارای متیلاسیون و بیان نسبی و ژن vhl نیز فاقد متیلاسیون و بیان کامل تحت این شرایط بودند. نتیجه گیری: همخوانی قابل توجهی بین بیان یک ژن و تغییرات اپی ژنتیک وجود دارد و بیان هر سه ژن مورد مطالعه، نشان دهنده ی نقش موثر آ ن ها در بیولوژی و عملکرد سلول های بنیادی خونساز دارد.