کلون کردن ژن جهش یافته آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس(pa) در باسیلوس سوبتیلیس
چکیده
سابقه و هدف: آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس پروتئینی با خاصیت اتصال به گیرنده های سطح تمام سلول های بدن انسان می باشد. در سطح سلول های سرطانی گیرنده اختصاصی فعال کننده یوروکینازی پلاسمینوژن (upa) ایجاد می شود که در سطح سایر سلول های نرمال بدن مشاهده نمی شوند. هدف از انجام این تحقیق تغییر جایگاه اتصال موجود بر روی pa با جهش زایی مستقیم می باشد به نحوی که این پروتئین فقط بتواند به سلول های سرطانی متصل گردد. مواد و روش ها: در طی این تحقیق پلاسمید pmna1 حاوی ژن pa به روش لیز قلیایی ازمیزبان خود جدا سازی شد. در ادامه با استفاده از پرایمر های فسفریله شده و استفاده از روش pcr هم پوشان جهش هدفدار بر روی ژن pa صورت پذیرفت. در ادامه قطعه حاصله بطور مستقیم بر روی ناقل ptz57r کلون و به e.coli سویه dh5α انتقال یافت. با استفاده از آنزیم های برش دهنده kpni و sali ژن pa جهش یافته جدا و بر روی ناقل pwb980 انتقال داده شد. در آخر با استفاده از روش الکتروپوریشن به b.subtilis سویه wb600 انتقال یافت. یافته ها: طی این تحقیق در توالی ژن pa با روش soe pcr جهش ایجاد کرده که در پی آن کد ژنتیکی اسید آمینه 194 تغییر کرد. جهش ایجاد شده با تعیین ترادف بازی تأیید گردید. نتیجه گیری: سرطان مشهور به بیماری غیر قابل درمان و مرگ آور است. یکی از روش های درمان سرطان استفاده از توکسین های باکتریایی است البته در صورتیکه فقط به سلول های سرطانی آسیب برساند. لذا با استفاده از پروتئین تغییر یافته pa که فقط به سلول های سرطانی متصل می گردد می توان امیدی تازه در درمان سرطان ایجاد کرد.