بیان و خالص سازی پروتئین کایمر نوترکیب (۳m۲e-ha۲) واجد نواحی حفاظت شده هماگلوتینین و پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا در راستای تولید واکسن زیرواحدی جهانی

ندا جلیلی، neda jalili msc in genetic, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranکارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران نجمه طاهری، najmeh taheri msc in molecular cell biology, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranکارشناس ارشد سلولی مولکولی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران رضوان توکلی، rezvan tavakoli msc in microbiology, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranکارشناس ارشد میکروب شناسی، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران فاطمه فتوحی، fatemeh fotoohi associate professor, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranاستاد، گروه آنفلوانزا و سایر ویروسهای تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران عطیه اکبری، atieh akbari msc in genetic, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranکارشناس ارشد ژنتیک، گروه آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران بهرخ فرهمند، behrokh farahmand assistant professor, department of influenza and other respiratory virus, institute pasteur of iran, tehran, iranتهران: انستیتو پاستور ایران، بخش آنفلوانزا و سایر ویروس های تنفسی

چکیده

سابقه و هدف: ویروس آنفلوانزا یکی از مهم‏ترین عوامل عفونی در سراسر جهان است که تغییرات آنتی‏ژنیک آن چالش بزرگی در مسیر تولید واکسن می‏باشد. در حال حاضر اکثر پژوهش‏ها بر روی توسعه واکسن‏های زیرواحدی حاصل از پپتیدهای آنتی‏ژنیک حفاظت شده ویروس متمرکز شده است. زیر واحد کوچک مولکول هماگلوتینین (ha2) و بخش آمینی خارج سلولی پروتئین کانال یونی (m2e) با 23 اسید آمینه، در همه ویروس‏های آنفلوانزای a انسانی بسیار حفاظت شده هستند و هدف مناسبی برای تولید واکسن آنفلوانزای وسیع الطیف می‏باشند. مواد و روش ها: در این پژوهش، قطعه ژنی 3m2e سنتتیک، بالا دست ژن ha2 در سازه pet28a-ha2 پس از هضم آنزیمی با آنزیم bamh1، کلون شد. سازه واجد کایمر 3m2e-ha2 به باکتری e.coli سویه bl21 منتقل شد و سلول‏ها در محیط مایع lb حاوی کانامایسین (50mg/ml) بعد از القا با ایزوپروپیل بتا دی تیو گالاکتوزید (iptg) به صورت کشت شبانه رشد داده شد. بررسی و تایید بیان سازه 3m2e-ha2 به وسیله الکتروفورز روی ژل پلی‏آکریل‏آمید page sds- و وسترن بلات با استفاده از آنتی‏بادی‏های مونوکلونال اختصاصی انجام شد و سپس پروتئین نوترکیب توسط ستون ni-ted تخلیص گردید. یافته ها: نتایج کلونی pcr و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد که ژن 3m2e در وکتور pet28a-ha2 به طور صحیح و در قاب خواندنی دنبال هیستیدینی کلون شده است. استنتاج: شناسایی آنتی‏بادی علیه اپی توپ‏های حفاظت شده ha2 و m2e، گامی مهم به سوی ساخت واکسن جهانی ویروس آنفلوانزا است، بنابراین سازه (3m2e-ha2)تهیه شده در این مطالعه می‏تواند کاندید واکسن زیر واحدی مناسبی برای پیشگیری از این عفونت باشد.