همسانه سازی و بیان ژن های ممزوجی دومن - a۱ آنتی ژن حفاظتی با سیلوس آنتراسیس و زیرواحد b سم شیگلا در باکتری e. coli
چکیده
مقدمه: یکی از فاکتورهای بیماری زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1 و e. coli o157:h7، انتروتوکسین شیگلایا (stxb) بوده که خاصیت ایمنی زایی، اجوانتی و دلیوری آن به اثبات رسیده است. سیاه زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام بوده و آنتی بادی دومن - a1 آنتی ژن حفاظت کننده باسیلوس آنتراسیس 62 درصد آنتی ژن های مربوط به آنتی ژن حفاظت کننده (pa) باکتری باسیلوس آنتراسیس را شناسایی می کند. هدف ایـن مطالعه بیان ممـزوجی دومن - a1 آنتی ژن حفاظتی باسیلوس آنتراسیس (pa20) با زیرواحد b سم شیگلا (stxb) در باکتری e. coli می باشد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، طراحی پرایمر برای ژن pa20 به منظور جایگزینی آن در کاست ژنی ipad-stxbصورت گرفت. واکنش pcr برای تکثیر این قطعه انجام و قطعه تکثیر شده به درون pgem-teasy vector همسانه سازی شد. ژن pa20 توسط آنزیم های محدودالاثر ndei و sali برش خورده و در نهایت ژن pa20 با ژن stxb ممزوج شد. وکتور pet28a(+) حاوی کاست ژنی pa20-stxb ساخته شده به باکتری e. coli سویه bl21(de3) تراریخت و بررسی بیان کاست ژنی انجام شد. نتایج: ژن های ممزوجی pa20-stxb در وکتور بیانی pet28a(+) توسط pcr، هضم آنزیمی و با توالی یابی تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه گذاری وسترن تایید گردید. نتیجه گیری: با توجه به شناسایی آنتی ژن (pa) به وسیله آنتی بادی pa20 و پایداری بالای آن در واکسن های ava و خاصیت القای آپاپتوز آن و خاصیت ایمنی زایی، اجوانتی و دلیوری پروتئین stxb و بیان زیاد gb3 در سطح سلول های سرطانی انسان این آنتی ژن به عنوان یک آنتی سرطان و کاندید واکسن نوترکیب علیه انواع شیگلا، اشریشیاکلی و باسیلوس آنتراسیس می تواند مطرح باشد.