مقاله

کلون، امتزاج و بیان نوترکیب ناحیه ۴ آنتی ژن حفاظت کننده باسیلوس آنتراسیس با زیرواحد b کلرا توکسین در باکتری اشرشیاکلی

بلال تقی پور، belal taghipour biology sciences dept., imam hussein university, tehran, i.r. iranمرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران حسین هنری، hosein honari biology sciences dept., imam hussein university, tehran, i.r. iran. tel: 00989138862174تهران، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، دانشکده علوم پایه، مرکزتحقیقات زیست شناسی، تلفن09138862174 دانیال جهان تیغ، danial jahantigh imam hussein universityدانشگاه جامع امام حسین(ع) مهدی رضایی، mehdi rezai imam hussein universityدانشگاه جامع امام حسین(ع) عبدالله شکیبادستگردی، abdollah shakiba dastgerdi medicine student, shahrekord university of medical sciences, shahrekord, i.r. iranدانشجوی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران

چکیده

زمینه و هدف: ترکیب یا اتصال ژنتیکی آنتی ژن ها با زیر واحد b کلرا توکسین =cholera toxin b) (ctb پاسخ آنتی بادی موکوسی قوی ای را ایجاد می کند. هدف از این مطالعه اتصال ctb به ژن کد کننده ناحیه 4 آنتی ژن حفاظت کننده (protective antigen domain 4=pad4) به منظور بیان پروتئین کایمریک به عنوان کاندیدا واکسن علیه بیماری سیاه زخم می باشد. روش بررسی: در این تحقیق تجربی آزمایشگاهی واکنش pcr با پرایمرهای اختصاصی برای ژن های ctbو pad4 انجام شد و ژن های تکثیر شده به طور جداگانه در pgem-t easy vector کلون شدند. سپس ژن pad4 به انتهای '3 ژن ctb با روش هضم آنزیمی متصل شد و ژن امتزاج شده ctb-pad4 در pet28a زیر همسانه سازی گردید. سویه bl21 باکتری e.coli توسط وکتور نوترکیب ترانسفورم شد و بیان پروتئین کایمر تحت القای ایزوپروپیل- بتا-d-1-گالاکتوپیرانوزید iptg)) قرار گرفت و به وسیله تکنیک sds.page و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: ژن امتزاج شده ctb-pad4 ساخته شد و با تکنیکpcr و تعیین توالی مورد تأیید قرار گرفت. این ژن در باکتری e.coli سویه bl21در دمای بهینه 37 درجه سانتیگراد بیان گردید و پروتئین کایمر با موفقیت تولید شد. باند مربوط به این پروتئین با تکنیک sds.page و وسترن بلات تأیید گردید. نتیجه گیری: این پروتئین نوترکیب بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان واکسن زیر واحدی کایمر جدید و موثر علیه باکتری باسیلوس آنتراسیس به صورت خوراکی یا استنشاقی استفاده شود.

اسناد مشابه