بیان ژن پروتئین پوششی ویروس x سیب زمینی در باکتری escherichia coli

ویروس x سیب زمینی از خانواده flexiviridae و جنس potexvirus می باشد یکی از رایج ترین و گسترده ترین ویروس های آلوده کننده سیب زمینی در جهان می باشد. برای ردیابی و شناسایی این ویروس در طبیعت، از روش های سرولوژیکی مبتنی بر واکنش بین آنتی بادی و آنتی ژن و روش های مولکولی استفاده می شود. به دلیل گسترش این ویروس در ایران و با توجه به خسارت اقتصادی آن در نقاط مختلف، شناسایی و ردیابی این ویروس با استفاده از روش های با صرفه تر ضروری می باشد. تولید آنتی بادی چندهمسانه ای شده از طریق روش های مولکولی، با استفاده از تولید آنتی بادی نوترکیب و با هدف تسهیل فرآیند شناسایی سرولوژیکی ویروس، می تواند در شناسایی این ویروس مفید باشد. بدین منظور، در ابتدا ژن پروتئین پوششی ویروس در ناقل بیان پروکاریوتی (pqe60) همسانه سازی گردید. سپس باکتری نوترکیب بدست آمده به باکتری escherichia coli سویه m15، منتقل شد. پس از القای بیان، پروتئین موردنظر استخراج گردید و با تکنیک sds-page در ژل پلی آکریلامید 5/12% مورد بررسی قرار گرفت. پس از رنگ آمیزی ژل، مشخص گردید که وزن مولکولی نوار مشاهده شده در آزمون sds-page با وزن مولکولی پروتئین پوششی بدست آمده با استفاده از نرم افزار آنلاین expasy نیز مطابقت دارد. به منظور تأیید بیان پروتئین پوششی ویروس از تکنیک دات بلات استفاده گردید که تأیید کننده بیان پروتئین پوششی pvx می باشد.