مقاله

کلونینگ ژن گلوکز اکسیداز آسپرژیلوس نایجر در پروکاریوت ها (وکتور pkk۲۲۳-۳)

جمشید راهب، j. raheb center of genetic engineering and biotechnology, tehran, iran.پژوهش گاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فن آوری آمنه محقق، a. mohaghegh payame noor university ,tehran, iran.دانشگاه پیام نور مرکز تهران محمدرضا اکبری عیدگاهی، m.r. akbari-eidgahi research center of biotechnology, semnan university of medical sciences, semnan, iran.دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی علی اکبر شعبانی، a.a. shabani research center of biotechnology, semnan university of medical sciences, semnan, iran.دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی الهام آقایی، e. aghaee center of genetic engineering and biotechnology, tehran, iran.پژوهش گاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فن آوری

چکیده

سابقه و هدف: گلوکز اکسیداز، آنزیمی است که در صنایع غذایی، شیمیایی، آرایشی و بهداشتی و هم چنین در کیت های تشخیص گلوکز استفاده می شود. در مرحله اول این طرح dna از قارچ رشته ای آسپرژیلوس نایجر atcc9029 با استفاده از روش سونیکاسیون و لیز در نیتروژن مایع جدا شد. سپس dna ژنومیک استخراج شده در پلاسمید ptz57r کلون شد، در ادامه این طرح، ژن گلوکزاکسیداز (go) به وکتور بیانی دیگر (pkk223-3) وارد شد، که پایه ای برای تولید این آنزیم در ایران می باشد. مواد و روش ها: پلاسمید نوترکیب pet21αg0 از باکتری dh5α-e. coli استخراج و توسط آنزیم های محدودکننده bamhi و hindiii برش داده و ژن گلوکز اکسیداز به طول kb8/1 جدا و سپس به داخل پلاسمید pkk223-3 وارد شد و در داخل میزبان e. coli-dh5αترانسفورم گردید. نقشه ژنی این پلاسمید نوترکیب با آنزیم های محدودکننده، تأیید و پلاسمید pkk223-3go نامیده شد. یافته ها: ژن کدکننده آنزیم گلوکز اکسیداز که به وسیلها restriction enzyme ز پلاسمید pet21α جدا شده بود، دارای اندازه صحیح در الکتروفورزیس ژل آگارز می باشد. ما نشان دادیم که پلاسمید نوترکیب pkk223-3go در restriction analysis دارای الگوی صحیح می باشد. نتیجه گیری: جداسازی و کلونینگ ژن گلوکز اکسیداز از طریق مهندسی ژنتیک می تواند برای کلونینگ در وکتور بیانی به منظور تولید این آنزیم به صورت نوترکیب به کار رود.

اسناد مشابه