مقاله

جدا سازی ژن گلوکز اکسیداز آسپرژیلوس نایجر و کلونینگ آن در پروکاریوت ها

جمشید راهب، j. raheb 1- center for genetic engineering and biotechnology, tehran, iranمرکز ملی تحقیقات مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی لیدا یکتامرام، l. yektamaram 1- center for genetic engineering and biotechnology, tehran, iranمرکز ملی تحقیقات مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی محمدرضا اکبری عیدگاهی، m.r. akbari eidgahi 2- center of biotechnology, semnan university of medical sciences, semnan, iran.دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی علی اکبر شعبانی، a.a. shabani 2- center of biotechnology, semnan university of medical sciences, semnan, iran.دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی الهام آقایی، e. aghaee 1- center for genetic engineering and biotechnology, tehran, iranمرکز ملی تحقیقات مهندسی ژنتیک و تکنولوژی زیستی

چکیده

سابقه و هدف: گلوکزاکسیداز آنزیمی است که در صنایع غذایی، شیمیایی، آرایشی و بهداشتی و همچنین در کیت های تشخیص گلوکز استفاده می شود. هدف این مطالعه شناسایی و جداسازی این ژن از ژنوم قارچ آسپرژیلوس نایجر از طریق pcr و کلونینگ آن درe. coli به منظور پایه ای برای تولید گلوکزاکسیداز نوترکیب در ایران است. مواد و روش ها: قارچ آسپرژیلوس نایجر (atcc 9029) در محیط حاوی پپتون و گلوکز و عصاره مالت و در حرارت ºc 24 به مدت 72-48 ساعت کشت داده شد. dna ژنومی قارچ به وسیله سونیکت کردن همراه با ساییدن قارچ سونیکت شده در نیتروژن مایع در بافر لیزکننده شامل edta و sds استخراج شد. برای جداسازی ژن، یک جفت پرایمر طراحی شد و در شرایط بهینه شده pcr، ژن گلوکزاکسیداز تکثیر شد. سپس این ژن به وسیله ins t/aclon tm pcr product cloning kit به داخل پلاسمید ptz57r کلون و در داخل میزبان dh5α،e. coli ترانسفورم شد. نقشه ژنی این پلاسمید نوترکیب با آنزیم های محدودکننده، تأیید و پلاسمید نوترکیب ptz57rgo نامیده شد. یافته ها: نتایج نشان داد که روش استفاده شده در این مطالعه برای کشت و استخراج dna از قارچ های رشته ای نظیر آسپرژیلوس مناسب است. همچنین ژن کدکننده آنزیم گلوکزاکسیداز که به وسیله تکنیک pcrجدا شده است دارای اندازه صحیح در آگاروز ژل الکتروفورزیس می باشد. ما نشان دادیم پلاسمید نوترکیب ptz57rgoدر restriction analysis دارای الگوی صحیح می باشد. نتیجه گیری: در این مطالعه ما ژن گلوکز اکسیداز را از طریق بهینه سازی شرایط pcr از آسپرژیلوس نایجر جدا و در یک میزبان پروکاریوتیک، کلون کردیم. این اولین گزارش از جداسازی و کلونینگ این ژن از طریق مهندسی ژنتیک در ایران است که می تواند برای کلونینگ در وکتور بیانی به منظور تولید این آنزیم به صورت نوترکیب به کار رود.

اسناد مشابه