بیان ژن زیر واحد b توکسین حساس به حرارت انتروتوکسیژنیک اشریشیاکلی (enterotoxigenic escherichia coli) در سالمونلا تیفی موریوم g۳۰: ایجاد پاسخ ایمنی با استفاده از یک مدل زنده خوراکی

محمدرضا اکبری عیدگاهی، m. r. akbari eidgahi department of biochemistry, pasteur institute of iran and semnan university of medical sciencesدانشگاه علوم پزشکی سمنان، بخش میکروبیولوژی-انستیتوپاستور ایران، بخش بیوشیمی بهمن ترابی، b. tabarar pasteur institute of iran, tehranتهران، انستیتوپاستور ایران ولادیمیر ریچنسکی، v. rechinsky office of scientific and industrial studies, presidency, tehran,lranنهاد ریاست جمهوری، دفتر مطالعات علمی و صنعتی

چکیده

سابقه و هدف: استفاده از سویه های تضعیف شده سالمونلا، نظیر سالمونلا تیفی موریوم g30، به منظور طراحی و ساخت واکسن های زنده خوراکی بر پایه سالمونلا (salmonella-based live oral vaccine) بسیار مورد توجه قرار دارد. این سویه ها برای بیان ژن های ایمنی بخش سایر مکیروارگانیسم ها در داخل بدن و تحریک پاسخ ایمنی به کار می روند. زیر واحد (lt-b) توکسین حساس به حرارت انتروتوکسیژنیک اشریشیاکلی (etec ،enterotoxigenic escherichia coli)، یک ایمونوژن قوی بوده و به عنوان کاندید برای ساخت واکسن علیه اسهال های ناشی از این میکروارگانیسم است. هدف این مطالعه بیان ژن کد کننده lt-b تحت دو پرموتر/رپرسور با قدرت متفاوت در سالمونلا تیفی موریوم g30 و ارزیابی آنها در ایجاد پاسخ آنتی بادی است. مواد و روش ها: ژن کند کننده lt-b، که تحت پروموترهای trc و lac کلون شده بود به سالمونلا تیفی موریوم g30 ترانسفورم گردید و دو سویه جدید g30tltb و g30ultb بدست آمد. lt-b نوترکیب تولید شده توسط این دو سویه از نظر ساختمانی و ایمونولوژیک مطالعه شده و همچنین توانایی این دو سویه در ایجاد پاسخ آنتی بادی در موش های c57/bl6 مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: lt-b نوترکیب تولید شده در هر دو سویه سالمونلا، از نظر تشکیل فرم پنتامر، وزن مولکولی و حرکت الکترفورزی، توانایی اتصال به رسپتور gm1 و حفظ شاخص های آنتی ژنیک بر علیه آنتی بادی های منوکلونال d15-9 و lt-39 مشابه فرم طبیعی lt-b بود. هر دو سویه نیز وقتی به عنوان واکسن خوراکی زنده به سوش های c57/bl6 خورانده شد قادر به ایجاد پاسخ بالا رونده آنتی بادی بودند. نتیجه گیری: سالمونلا تیفی موریوم g30 قادر بود ژن کد کننده lt-b را در in vivo در عدم حضور القا کننده های شیمیایی نظیر iptg، بیان و پاسخ آنتی بادی علیه آن ایجاد کند. بهینه سازی شرایط بیان ژن می تواند گامی در جهت ساخت یک واکسن زنده خوراکی علیه اسهال ناشی از انتروتوکسیژنیک e.coli باشد.