کنترل‏ زیستی‏ علف‏ هرز‏ پیچک‏ صحرایی convolvulus arvensis با‏ استفاده‏ از پروتئین‏ نوترکیب‏ nep۱‏ حاصل‏ از fusarium oxysporum‏

حمید مقیمی، الهام رضازاده، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم دارویی علی محمد لطیفی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران جواد حامدی، دانشگاه تهران ضرغام سپهری زاده

چکیده

مقدمه:‏ پروتئین‏ nep1‏ یک‏ علف‏کش‏ زیستی‏ است‏ که‏ به‏ طور‏ مؤثر‏‏‏‏ی‏ باعث‏ از‏ بین‏ رفتن‏ تعداد‏ زیادی‏ از‏ گیاهان‏ دولپه‏‏ای‏ و‏ از‏ جمله‏ طیف‏ وسیعی‏ از‏ علف‏های‏ هرز‏ می‏‏شود. این‏ پروتئین‏ برای‏ نخستین‏ بار‏ در‏ سال‏ 1995‏ از‏ مایع‏ تخمیر‏ قارچ‏ fusarium oxysporum‏‏ خالص‏سازی‏ ‏‏شد‏‏. مواد‏ و‏ روش‏‏ها:‏ در‏ این‏ پژوهش،‏ ژن‏ nep1‏ از‏‏ f. oxysporum‏ جداسازی‏ و پس ‏‏از‏ حذف‏ سیگنال‏ نشانه‏ از‏ ابتدای‏ ژن، ساختار‏ نهایی‏ در‏ حامل‏ pet16b‏ کلون‏ و‏ به‏ باکتری (de3) bl21 e. coli‏ انتقال‏ داده‏ شد. پروتئین‏ نوترکیب‏ پس‏ از‏ تولید‏ در‏ باکتری، خالص‏سازی‏ ‏‏و‏ رقت‏های‏ ‏‏مناسب‏ از‏ آن‏ برای‏ سنجش‏ زیستی‏ روی‏ گیاه‏ هرز‏ تهیه‏ شد. نتایج:‏ دو‏ میلی‏‏‏‏لیتر‏ از‏ پروتئین‏ نوترکیب‏ تولید‏ شده‏ با‏ غلظت‏ 60 میکروگرم‏ در‏ میلی‏‏‏‏لیتر‏ به‏ گیاه‏ بالغ‏ پیچک‏ صحرایی‏ اسپری‏ شد. نتایج‏ به‏ دست‏ آمده‏ نشان‏ داد‏ که‏ برگ های‏ گیاه پس ‏‏از‏ حدود‏ 2‏ روز‏ شروع‏ به‏ زرد‏ شدن‏ و‏ نکروز‏ وسیع‏ کردند. نکروز‏ کامل‏ و‏ مرگ‏ گیاه‏ هرز،‏ 5‏ روز‏ پس‏ از‏ اسپری‏ مشاهده‏ شد. از‏ اسپری‏ بافر‏ بدون‏ پروتئین‏ نوترکیب‏ و‏ همچنین،‏ پروتئین‏ nep1‏ نوترکیب‏ تقلیب‏ شده‏ از‏ طریق‏ 15‏ دقیقه‏ تیمار‏ حرارتی‏ در‏ 100‏ درجه‏ سانتی‏گراد‏ به‏ عنوان‏ شاهد‏ استفاده‏ شد‏ که پس ‏‏از‏ گذشت‏ 5‏ روز‏ هیچگونه‏ علامتی‏ روی‏ برگ‏های‏ ‏‏گلدان‏های‏ ‏‏شاهد،‏ مشاهده‏ نشد. بحث‏ و‏ نتیجه‏گیری:‏ نتایج‏ به‏ دست‏ آمده‏ در‏ این‏ پژوهش‏ نشان‏ داد‏ که‏ می‏‏توان‏ از‏ پروتئین‏ نوترکیب‏ nep1‏ به‏ عنوان‏ یک‏ عامل‏ زیستی‏ توانمند‏ در‏ کنترل‏ گیاه‏ هرز‏ c. arvensis‏ استفاده‏ کرد.