همسانه سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع b باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری e. coli
چکیده
پیش زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین ها دارای هفت سروتیپ از a – g می باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط bont/b استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده ی ناحیه اتصالی آن می باشد. چون دارای اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می باشد.مواد و روش ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت ncbi گرفته شد. سپس پرایمرهای مناسب برای آن طراحی شد. سپس باکتری کشت داده شد و ژنوم آن استخراج شد. از pcr برای تکثیر ژن استفاده گردید. ژن در وکتور pgem-teasy وارد شد. بعدوکتور نوترکیب وارد باکتری e. colidh5α گردید. سپس، زیرهمسانه سازی در باکتری e. colibl21 با استفاده از وکتور بیانی pet28a(+) انجام شد.نتایج: واکنش های pcr، تعیین توالی و نتایج حاصل از آن توسط iptg و بررسی بر روی sds – page و تائید به روش وسترن نشان دهنده صحت کلونینگ و بیان بود.نتیجه گیری: کلون و بیان این کاندید واکسن با موفقیت انجام شد و پتانسیل ایمنی زایی باید بررسی شود.