مقاله

زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bd/a)

مجید زواری، majid zavvary 1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران فیروز ابراهیمی، firouz ebrahimi 1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران شهرام نظریان، shahram nazarian 1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران عباس حاجی زاده، abbas hajizadeh 1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران یوسف تاروردی زاده، yousof tarverdizadeh 1biology research center, faculty of sciences, imam hossein university, tehran, iran.مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران

چکیده

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از a-g می باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (bont)، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a (bont/a) بررسی گردید روش بررسی: در ابتدا ژن ناحیه bont/a از genbank با شماره دسترسی cp000727.1 تهیه و براساس ترجیح کدونی e. coli، بهینه سازی کدون انجام شد. سپس در پلاسمید pet28a، سنتز و بعد از آن در پلاسمید بیانی pgex-4t-1، زیرهمسانه سازی شد. زیرهمسانه سازی با استفاده از روش pcr با آنزیم pfu dna polymerase و سپس برش دوگانه با آنزیم های xmai و xhoi انجام گرفت. از سویه e. coli bl21 به عنوان میزبان برای بیان استفاده شد. مارکر انتخابی برای pgex-4t-1، آمپی سیلین بود. یافته ها: روش های pcr و برش محدودکننده با آنزیم های ذکرشده، زیرهمسانه سازی را تأیید کردند. بررسی بیان با استفاده از روش های sds-page و وسترن بلاتینگ (با استفاده از آنتی بادی اسبی ضدbont/a)، سپس کروماتوگرافی تمایلی گلوتاتیون انجام گرفت. با اینکه زیرهمسانه سازی با موفقیت انجام شد، ولی با به کارگرفتن روش های ذکرشده، هیچ گونه بیان پروتئین مشاهده نشد. نتیجه گیری: براساس نتایج این مطالعه، به نظر می رسد باید میزبان های دیگری مانند میزبان های یوکاریوتی برای بیان نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a مورد استفاده قرار گیرند.

اسناد مشابه