بیان ژن مصنوعی stxb-ctxb در ریشه های موئین تراریخت

بیماری اسهال از معضلات مهم بهداشت جهانی برای جوامع انسانی و سیستم های پرورش صنعتی دام محسوب می شود. از مجموعه عوامل بیماری زا، باکتری های روده ای نقش مهمی در ایجاد این بیماری ها دارند. از میان سموم تولید شده توسط این باکتری ها، سم حساس به حرارت (lt) باکتری اشریشیا کلی مولد سم روده ای (etec)، سم کلرا (ctx) باکتری ویبریو کلرا و سم شیگا باکتری اشریشیا کلی خونریزی دهنده روده ای (ehec) که به ترتیب عامل ایجاد اسهال مسافرتی، اسهال آبکی و اسهال خونی و غیر خونی می باشند، به عنوان عوامل جدی ایجاد عفونت های روده ای در کشورهای در حال توسعه شناخته می شوند. این سموم به خانواده ab5 تعلق دارند که در آن ها زیرواحد b مسئول اتصال سم به سطح سلول میزبان و تسهیل ورود بخش فعال سم به داخل سلول می باشد. مطالعات گذشته حاکی از آن است که مصرف زیرواحد b به صورت خوراکی می تواند سیستم ایمنی را به خوبی تحریک کرده و میزبان را علیه کل سم ایمن نماید. بنابراین برای استفاده به عنوان قسمتی از یک واکسن خوراکی مناسب می باشد. ریشه های مویین گیاهان رآکتور زیستی مناسبی برای تولید ایمونوژن های نوترکیب محسوب می شوند. در این تحقیق تولید ریشه های مویین با کمک اگروباکتریم رایزوژنز در گیاهان توتون و کلزا به منظور تولید پروتئین های کایمریک lsc (متشکل از زیرواحدهای ltb-stxb-ctxb) و sc (متشکل از زیرواحدهای stxb-ctxb) القا شدند. پس از تأیید تراریختی ریشه های مویین با روش pcr، میزان پروتئین نوترکیب تولید شده در ریشه های مویین توتون و کلزا به ترتیب معادل 05/0% و 08/0% کل پروتئین محلول گیاه تعیین گردید. به منظور ایجاد ایمنی در مدل حیوانی (به روش تزریقی) پروتئین stxb نیز در میزبان e. coli bl21(de3) تحت کنترل پروموتر t7 بیان شد. پروتئین نوترکیب تولید شده سپس به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص شد. میزان پروتئین تولید شده حدود 76 میلی گرم در یک لیتر محیط کشت تخمین زده شد. نتایج این تحقیق بیان گر کارایی بالای سیستم ریشه های مویین برای تولید پروتئین های نوترکیب می باشد.