شناسایی سریع باکتری ویبریو کلرا با استفاده از واکنش زنجیرهای پلیمراز ششگانه (hexaplex pcr)
چکیده
مقدمه: ویبریو کلرا (عامل بیماری وبا) یک پاتوژن مهم در بروز بیماری اسهال در بخش های گسترده ای از آسیا و آفریقا است. این باکتری یک پاتوژن روده ای است که می تواند سبب بروز بیماری همه گیر گردد. درنتیجه تشخیص سریع، حساس و اختصاصی ویبریو کلرا، مورد توجه اکثر آزمایشگاه های تشخیصی است. هدف از این پژوهش، طراحی و توسعه یک روش سنجش سریع ژنوم باکتری ویبریو کلرا بر اساس واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه (hexaplex pcr) است. مواد و روش ها: پرایمر جهت شناسایی شش ژن بیماری‌زا و تنظیمی از باکتری ویبریو کلرا انجام شد. ژن های مذکور شامل ژن های کلرا توکسین زیر واحدهای a و (ctxa, ctxb) b، توکسین zot، انتروتوکسین کلرا (ace)، توکسین تنظیمی (tcp) و پروتئین غشاء خارجی (ompw) است. ژنوم نمونه استاندارد، با استفاده از پرایمرهای مذکور در واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه، مورد مطالعه قرار گرفت. همچنین حساسیت و اختصاصیت سنجش مذکور نیز ارزیابی شد. یافته ها: انجام pcr شش تایی، حضور ژن های بیماری زا و تنظیمی باکتری ویبریو کلرا را در نمونه استاندارد نشان داد. همچنین نتایج بیانگر اختصاصیت مناسب روش بوده و حساسیت آن تا حدود cfu 100 از باکتری محاسبه گردید. نتیجه گیری: از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز شش گانه می توان برای طراحی کیت تشخیصی عامل بیماری وبا استفاده نمود.