تهیه و تخلیص آنتی بادی منوکلونال علیه آنتی ژن لیپوآرابینومان مانوزیله مایکوباکتریوم بویس
چکیده
مقدمه و هدف: لیپوآرابینومان مانوزیله (manlam) از آنتیژن های گلیکولیپیدی است که درصد قابل توجهی از دیواره سلولی باکتری مایکوباکتریوم بویس ب ث ژ را تشکیل می دهد. نظر به اینکه تولید آنتی بادی منوکلونال آن، بهویژه در طراحی کیت تشخیص سریع بیماری سل کاربردهایی فراوان دارد، لذا هدف از تحقیق حاضر، تولید آنتی بادی منوکلونال ضد این آنتیژن می باشد. مواد و روش کار: پس از تزریق های منظم موش های balb/c با bcg سونیکیتشده، آنتی ژن lam، تیتر آنتی بادی تولیدشده بررسیگردید. لنفوسیت های طحالی موشها و سلولهای میلومای sp2/0 با کمک پلی اتیلن گلیکول امتزاجدادهشدند. سلولها در محیط hat انتخابشدند و کلون های مولد آنتی بادی ضد آنتی ژن lam با استفاده از آزمون الایزا شناساییشدند؛ پس از تخلیص آنتیبادی منوکلونال، شناسایی آنتیژنهای لیپوآرابینومان مانوزیله و bcg سونیکیتشده با روش وسترن بلاتینگ انجامگرفت. نتایج: تعداد2 کلون h2-3b9 , h1-3d3 مولدآنتی بادی اختصاصی با جذب بالا در آزمایش الایزا، انتخابشدند. نتایج وسترن بلاتینگ، باند30 کیلو دالتونی مربوط به آنتیژن های لیپوآرابینومان مانوزیله و bcg سونیکیتشده با استفاده از آنتیبادی های منوکلونال igm و igg3 را تأییدمی کرد. نتیجهگیری: نتایج نشانداد که امکان تولید و تخلیص آنتیبادی منوکلونال با استفاده از امتزاج لنفوسیت های b طحال موشهای ایمنشده و سلولهای میلوما وجودداشته، تأیید واکنش اختصاصی آنتیبادی مذکور قبل از انجام مطالعات تشخیصی در شناسایی سریع سل در ادرار بیماران و بررسی های مصونیتزایی واکسن ب ث ژ مورد توجه خواهدبود.