کلونینگ و بیان موقت ژن محافظت کننده سلولی، ho-۱ ، در سلول های بنیادی مزانشیمال از طریق سیستم بیانی آدنوویروس بر مبنای تکنولوژی gateway
چکیده
چکید ه سابقه و هدف ho-1 (هِم اکسیژناز-1) یکی از عوامل قدرتمند محافظت کننده سلولی می باشد. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان موقت ژن ho-1 انسانی در سلول های بنیادی مزانشیمال( msc ها) با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی برمبنای تکنولوژی gateway بود. مواد و روش ها در یک مطالعه تجربی، به منظور القای ho-1 ، رده سلولی 549 a به مدت 1 ساعت با اشعه uv مواجه گردید. cdna توتال ho-1 جداسازی شد و از طریق واکنش کلونینگ topo به وکتور pentr topo/d کلون گردید. برای ایجاد کلون بیانی، واکنش نوترکیبی lr بین کلون اولیه و وکتور مقصد( pad/cmv/v5-dest ) به انجام رسید. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تشکیل شد. msc ها به وسیله ویروس نوترکیب بیان کننده ho-1 آلوده سازی شدند. یافته ها نتایج نشان داد که ho-1 انسانی نوترکیب با موفقیت کلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی dna تایید شد. بیان ho-1 در msc ها به وسیله آنالیز rt-pcr و وسترن بلات تایید گردید. این نتایج حاکی از این بود که بیان ho-1 موقت است. نتیجه گیری بیان موقت ژن ho-1 انسانی در msc ها با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی، ممکن است یک استراتژی انتقال ژنی کارآمد در راستای ارتقای سلول درمانی فراهم نماید.